內(nèi)毒素與補體：補體級聯(lián)反應(yīng)的介紹

補體的級聯(lián)反應(yīng)傳統(tǒng)分為經(jīng)典途徑和旁路途徑，近年來按照其功能將補體級聯(lián)反應(yīng)分為三個部分。

1.第一前端反應(yīng)

第一前端反應(yīng)指由C1到C3的反應(yīng)順序，也稱C1途徑，即傳統(tǒng)的或經(jīng)典的補體激活途徑的前端部分。參與的補體成分為C1（C1q、C1r、C1s）、C4、C2及C3，受到C1抑制物（C1-in）等因子的調(diào)節(jié)。

2.第二前端反應(yīng)

第二前端反應(yīng)由C3、C3b、B因子，D因子等幾個成分參與，受備解素（P）等的調(diào)節(jié)，也稱備解素系統(tǒng)、C3旁路、替代途徑等。由于第一和第二兩個前端反應(yīng)序列在C3交匯，因此C3常被稱為補體系統(tǒng)的中心分子。

3.末端補體復(fù)合物（terminal complement complex，TCC）

由第一前端反應(yīng)形成的C3轉(zhuǎn)化酶C4b2a，以及由第二前端反應(yīng)途徑形成的C3轉(zhuǎn)化酶C3bBb，在另一些C3b分子存在的情況下，可分別形成第一途徑的C5轉(zhuǎn)化酶（C4b2a3b）及第二途徑的C5轉(zhuǎn)化酶（C3bBb3b或C3bnBb）。這兩種酶可將C5裂解為大、小兩個片段C5b及C5a，C5b上有C6受體，可結(jié)合成C5b6，以后陸續(xù)與C7、C8及多分子C9結(jié)合，最后形成C5b～9，即TCC。TCC若在膜上有多個C9分子參與，則形成（C5b~C8）-（C9）n，即膜攻擊復(fù)合體（membrane attack complex，MAC），可使靶細胞溶破從而被消除（圖14-1）。

血漿中的補體級聯(lián)反應(yīng)激活后，血漿中的補體固有成分被消耗，活性降低，或補體分裂產(chǎn)物增加，故檢測補體各種成分及分裂產(chǎn)物的活性可反映補體系統(tǒng)激活的程度。補體活性常用以下幾種方法來檢測，需要注意的是備測的血漿標(biāo)本必須為新鮮的或保存在-80~-70℃的溫度下，如保存溫度過高、再溶化或使用血清標(biāo)本均可引起補體級聯(lián)反應(yīng)的自發(fā)激活，造成補體分裂產(chǎn)物的假性高值以及補體固有成分的假性低值。

總補體測定可采用滴定的方法，其活性以每毫升未稀釋血清的溶血單位的50%來表示。在補體中加入結(jié)合了抗羊紅細胞抗體的羊紅細胞，應(yīng)用光度檢測法估計部分溶血的程度作為完-全溶血的百分比。血漿或血清中各種補體固有蛋白（如B因子，D因子、C1，C3、C4，C5、C6、C7、C8和C9）和調(diào)節(jié)因子（如因子1、C1-in）的濃度可用免疫技術(shù)測定，如放射免疫擴散、火箭免疫電泳沉淀、雙向火箭免疫電泳沉淀等，過敏毒素（C3a、C4a和C5a）亦可用放射免疫檢測方法測定，其改良方法的試劑盒有市售，這種方法是將EDTA-血漿與鹽酸混合，因為C3或C5在酸性環(huán)境下變性沉淀，而對酸穩(wěn)定的過敏毒素仍保持溶解狀態(tài)。通過檢測C3a或C5a可分析補體激活的程度，而測定C4a則可鑒別經(jīng)典抑或旁路激活途徑。亦有采用ELISA方法檢測過敏毒素的。近20年來開展了多種用以定量測定血漿末端C5b~9補體復(fù)合物的免疫測定方法研究。

補體的級聯(lián)反應(yīng)是一個連續(xù)的過程，而補體的第一前端反應(yīng)一般需要激活才能順利進行，即C1r與C1s從酶原形式轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘牡鞍酌?/span>C1r和C1s，這種激活分為自發(fā)性激活和激活物激活。自發(fā)性激活的速率較慢；而激活物激活反應(yīng)迅速，反應(yīng)量大，其激活物又可分為免疫性激活物與非免疫性激活物。免疫性激活物一般指免疫復(fù)合物，非免疫性激活物種類多樣，按其化學(xué)性質(zhì)可分為蛋白質(zhì)類、糖類、脂類等。目前常依據(jù)其與C1q相互作用抑或與非C1q相互作用而分為兩大類，革蘭陰性細菌的內(nèi)毒素LPS等就是已知的與C1q反應(yīng)的非免疫激活物，纖維蛋白溶酶則是與非Clq反應(yīng)的非免疫性激活物。下面介紹一下內(nèi)毒素激活補體級聯(lián)反應(yīng)的過程和結(jié)果。

現(xiàn)已知道，C1由C1q、C1r、C1s三種亞成分組成。其中，C1q是補體激活途徑的識別單位，是補體激活劑的受體，C1r 與C1s則為酶原。內(nèi)毒素就是通過與C1q的膠原樣區(qū)相結(jié)合，進而激活C1r、C1s酶原變?yōu)?/span>C1s的。后者為一種絲氨酸蛋白質(zhì)，催化C4b和C2成為C4b2，經(jīng)過如圖14-2所示的途徑形成過敏毒素（C3a、C5a）和末端補體復(fù)合物。