在生物制品、藥品及醫(yī)療器械的生產(chǎn)過程中，熱原與細菌內(nèi)毒素的檢測是確保產(chǎn)品安全放行的重要一環(huán)。美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）通過一系列指導文件，如美國藥典（USP）第<85>章“細菌內(nèi)毒素檢測"、USP第<161>章“輸血和輸液組件及類似醫(yī)療器械"，以及美國醫(yī)療器械促進協(xié)會（AAMI）ST72:2002/R2010《細菌內(nèi)毒素——檢測方法、常規(guī)監(jiān)測和批量檢測替代品》，為行業(yè)提供了詳盡的檢測建議和驗收標準。

本文旨在基于這些指導文件，并補充了藥典未涵蓋的監(jiān)管觀點，以明確FDA對產(chǎn)品熱原和細菌內(nèi)毒素檢測提交與維護的看法。今日第一期，誠邀您一探究竟！

Q1：對于中控測試和成品放行，如何建立取樣計劃?

針對制劑的CGMP法規(guī)和醫(yī)療器械質量體系法規(guī)，要求研發(fā)控制措施時必須具備充分的科學性和制定恰當?shù)娜佑媱潯?/span>

盡管USP通則<85>未直接涉及取樣計劃的詳細信息，但AAMI ST72指南中提供了相關指導。制藥公司應該增加一個取樣計劃作為應用文件的一部分。在制定取樣計劃時，公司需全面考慮原輔材料、中間物料及成品中潛在的污染風險，并特別關注制造設計因素，如工藝一致性、中控保持時間對細菌內(nèi)毒素水平的影響、細菌內(nèi)毒素去除步驟的有效性，以及成品內(nèi)毒素標準的設定。

此取樣計劃應被視為動態(tài)管理的一部分，初期應追求最大覆蓋范圍以確保充分控制。隨著制造工藝的成熟和內(nèi)控能力的增強，公司可適時調整取樣計劃以優(yōu)化資源利用。在調整取樣計劃時，制藥公司必須及時更新其法規(guī)文件，確保與現(xiàn)行法規(guī)要求保持一致。

對于藥品和生物制品，取樣計劃的任何中間變更通常需作為年度報告的一部分進行提交。而對于醫(yī)療器械，則可能需采取30天通知的方式，以便監(jiān)管機構及時了解變更情況并進行評估。

Q2：什么時候進行復驗是合適的?

在測試過程中，若遇到?jīng)_突性結果，制藥公司應首先參考USP通則<85>中關于凝膠法測試的解釋部分，以獲取關于復驗的明確指導。根據(jù)通則<85>的特別說明，當測試在低于最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）時失敗，應采取一個不超過MVD的更大稀釋倍數(shù)來進行復驗。

在進行復驗時，實驗室必須詳細記錄所有測試過程，包括失敗的測試記錄，以便后續(xù)分析和追溯。如果測試在MVD水平進行且出現(xiàn)超標結果（OOS），不能歸因于測試錯誤，該批次應被視為不合格并予以拒收。

為確保測試過程的一致性和合規(guī)性，所有測試規(guī)程，包括上述提到的復驗規(guī)程，都應以書面的標準操作規(guī)程（SOP）形式提前建立，并經(jīng)過公司質量控制部門負責人的嚴格審查和批準。

Q3：樣品的儲存和處理是否重要?

重要。儲存和處理步驟影響細菌內(nèi)毒素檢測的能力。企業(yè)應利用證明可檢測細菌內(nèi)毒素含量穩(wěn)定性的實驗室數(shù)據(jù)，制定用于細菌內(nèi)毒素分析的樣品儲存和處理（包括產(chǎn)品混合）程序。規(guī)程應考慮到研究中使用的細菌內(nèi)毒素來源，同時牢記純化的細菌內(nèi)毒素與本地細菌內(nèi)毒素的反應可能不同。

Q4：在分析之前，用于內(nèi)毒素分析的成品樣品是否可以混合組成復合樣品?

是的。除了一些例外情況（見下文），成品單位可以混合組成復合樣品以進行細菌內(nèi)毒素分析。復合樣品可以是水溶性藥品中一個生產(chǎn)批次中的整個單位或成品容器的部分等分樣品（等容積）。對于小容量注射劑（≤100ml），只要按比例調整最大有效稀釋倍數(shù)（MVD），樣品混合通常是可接受的，因為將含有有害水平細菌內(nèi)毒素的樣品和含有較低的、較小危害水平內(nèi)毒素的樣品一起稀釋具有降低數(shù)值的潛在可能性。

這種“調整后的MVD"是通過將單個樣本計算的MVD除以要混合的樣本總數(shù)而獲得的。FDA建議在每個復合樣品中不要混合多余3個樣品，以保持開始、中間和最后產(chǎn)品容器的樣品代表性。如果由于稀釋不夠，導致MVD降低，無法克服與產(chǎn)品有關的檢測干擾，則應單獨檢測樣品。

醫(yī)療器械成品也可以混合成一個復合樣品進行細菌內(nèi)毒素分析。對醫(yī)療器械的檢測應采用ISO 10993-1和ISO 10993-12中所述的淋洗法/洗脫法進行測試，也適用于抑制和增強的目的。取樣可根據(jù)特殊情況進行調整。在適當?shù)南♂?/span>/富集后，可以獲得一個生產(chǎn)批次成品的復合樣品，這個混合的富集物應該保存在對穩(wěn)定性有利的條件下，直到進行平行樣測試。

FDA建議混合樣品應該由對每個產(chǎn)品容器采用無菌工藝均等去除（最少30秒劇烈混合）后構成的復合樣品。在這種情況下，假如混合樣品發(fā)生OOS情況，原始單個容器才可以進行復驗。

有些類型的產(chǎn)品不能混合。兩個例子分別是，具有最初較低的MVD的藥品（參見上文“調整后的MVD"的討論）和混懸液產(chǎn)品，因為樣品均分時，均性會面臨顯著差異。FDA也不建議對來自制造工藝的不同中控階段中控樣品進行混合，因為這些物料的均勻性很難確認。

隨著對熱原與細菌內(nèi)毒素檢測從取樣到處理的全面剖析，相信您已對這一關鍵質量控制環(huán)節(jié)有了更為清晰的認識，今日第一期僅是系列文章的序幕，更多精彩內(nèi)容即將陸續(xù)呈現(xiàn)，誠邀您持續(xù)關注！